18禁真人抽搐一进一出在线,精品国产成人亚洲午夜福利,日本少妇高潮喷水XXXXXXX,在线高清日韩大全免费观看

產(chǎn)品列表 / products

首頁 > 技術(shù)文章 > 分離豬胚胎多能干細(xì)胞方法

分離豬胚胎多能干細(xì)胞方法

點擊次數(shù):1083 更新時間:2019-04-09

胚胎干細(xì)胞從囊胚內(nèi)細(xì)胞團分離得到,具有自我更新和分化為3個胚層和生殖細(xì)胞的潛能。豬胚胎分離培養(yǎng)體系會改變細(xì)胞核移植胚胎、孤雌胚胎和體內(nèi)胚胎多能基因的表達(dá),也會影響豬多能干細(xì)胞形成的效率和質(zhì)量。自增壓液氮罐

細(xì)胞培養(yǎng):用于核移植供體的豬胎兒成纖維細(xì)胞從初生豬仔的耳部分離得到。細(xì)胞培養(yǎng)基為DMEM,15%胎牛血清,培養(yǎng)溫度為37℃。使用0.25%(W/V)的胰蛋白酶消化,中和后離心200×g。將細(xì)胞重懸后并加入等量凍存液(40%DMEM,40%FBS和20%DMSO),貯存在液氮中。

卵母細(xì)胞的收集和準(zhǔn)備:從屠宰場收集豬卵巢,保存在含有青/鏈霉素的生理鹽水中,運輸溫度32~38℃,3h內(nèi)運回實驗室。采用抽吸法采集卵巢卵母細(xì)胞。抽取3~6mm卵泡中的卵母細(xì)胞置于15mL離心管中,37℃水浴靜置數(shù)分鐘,待卵母細(xì)胞沉降后,用洗卵液洗2遍,顯微鏡下挑取顆粒細(xì)胞層達(dá)3層以上的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合物,然后將COCs轉(zhuǎn)入U型皿中培養(yǎng)42~44h,每孔加500μL成熟培養(yǎng)液,每孔放置50~70枚。

孤雌激活和胚胎培養(yǎng):用電融合儀將成熟的卵母細(xì)胞進行電激活,將卵母細(xì)胞移至2mmol/L6D孵育2.5h。分別將卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)移到胚胎培養(yǎng)基G1、NCSU23和豬受精卵培養(yǎng)基,24h后記錄卵裂率。3d后,將培養(yǎng)基G1中發(fā)育的胚胎移入囊胚培養(yǎng)基G2。再次培養(yǎng)3~4d后,統(tǒng)計囊胚個數(shù)并收集。

體細(xì)胞核移植胚胎培養(yǎng):去除成熟卵母細(xì)胞極體,隨后注入供體細(xì)胞。顯微操作后,移入含10%FBS的M199培養(yǎng)基,在38.5℃,5%CO2條件下孵育0.5h,使用電融合儀進行激活處理,移入6D孵育2.5h后,將重組胚胎在NCSU23培養(yǎng)基中培養(yǎng)3d,隨后替換NC-SU23繼續(xù)培養(yǎng)3~5d,觀察胚胎的發(fā)育。

體內(nèi)胚胎的收集:從人工受精的母豬體內(nèi)收集第7~8d的囊胚,所有方法參照Stokes等。每天監(jiān)測母豬的發(fā),將發(fā)日期作為0d,鑒定后的6、12和18h進行人工受精。從子宮沖洗胚胎時使用預(yù)熱的含10%FBS的磷酸緩沖鹽溶液。

從豬胚胎分離胚胎多能干細(xì)胞:將去除透明帶的囊胚接種到絲裂 素C處理過的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上2~4d,囊胚內(nèi)細(xì)胞團在3~5d后出現(xiàn)。待ICM大小適中時,用機械法分離細(xì)胞,重鋪到新的飼養(yǎng)層上,并使用不同的豬胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基,胚胎多能干細(xì)胞克隆每5~7d使用機械法傳代。自增壓液氮罐

15611258074
在線咨詢
韩国精品一区二区三区无码视频 | 小箩莉末发育娇小性色xxxx| 在线免费看电影| А√天堂资源地址在线官网| 老头的老枪又粗又长净身老枪图片| 小太正裸体脱裤子无遮挡| 亚洲中文无码A∨在线观看| 中国老熟女重囗味hdxx| 重口老太大和小伙乱| 亚洲人成色7777在线观看不卡 | 国产97人人人超碰超爽| 看AV免费毛片手机播放| 车后座挺进朋友人妻女友| XXXXX性BBBBB欧美| 日产无码久久久久久精品| 正文第1章初尝云雨| 国产精品成人无码免费| 欧洲高清视频在线观看| 亚洲精品无码国产| gogogo免费观看日本| 人妻在厨房被色诱 中文字幕| 香蕉欧美成人精品av在线| 特黄a又粗又大又黄又爽a片| 青青草在线视频| 久久99精品久久久久久| 可脱卸衣服的游戏| 免费观看全黄做爰的视频| 国产又爽又黄无码无遮挡在线观看| 日本AAA少妇高潮免费中国| 男朋友整根进去了但我没感觉| 最新大胆西西人体44RT| 欧美精品V国产精品V日韩精品| 亚洲精品午夜久久久伊人| 亚洲国产精品无码久久一区二区 | 无遮挡粉嫩小泬久久久久久久| 握住校花两团雪乳高h| 脱警花警服露大白乳| 色综合色狠狠天天综合色| 亚洲精品无码久久久久APP| 人妻被黑人猛烈进入a片| 性一交—乱一性一A片在线播放|